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右旋糖酐酶(Dextranase, E.C.3.2.1.11)能够催化水解右旋糖酐中的α-1,6糖苷键,并释放出异麦芽糖、异麦芽三糖等。右旋糖酐酶在催化水解高分子右旋糖酐制备药用右旋糖酐起着关键的作用。 本研究从土壤中筛选获得4株产右旋糖酐酶的活性真菌,对其中两株F1001和F1002进行深入研究,通过菌株形态、培养特征以及ITS rDNA序列分析,确定F1001为棘孢青霉,F1002为哈茨木霉;随后对菌株F1001和菌株F1002发酵条件进行初步研究,确定两种菌株的最佳碳源为右旋糖酐T70,最佳氮源为NaNO_3。菌株F1001的最佳培养条件为培养基初始pH为5.0,最适培养温度为28℃,培养时间为5天;菌株F1002的最佳培养条件为培养基初始pH为6.0,最适培养温度为28℃,培养时间为6天。分别对棘孢青霉及哈茨木霉右旋糖酐酶进行分离纯化,经过硫酸铵分级沉淀和Sepharose6B凝胶色谱层析分离得到右旋糖酐酶,棘孢青霉右旋糖酐酶从粗酶液到最后纯化产物共纯化了7.884倍,回收率为13.2%,纯化后酶的比活力高达20608U/mg;而哈茨木霉右旋糖酐酶从粗酶液到最后纯化产物共纯化了8.3倍,回收率为10.73%,纯化后酶的比活力高达2782IU/mg;通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS PAGE)测得棘孢青霉右旋糖酐酶的分子量为66kDa左右,哈茨木霉右旋糖酐酶分子量为62kDa左右。

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